高手请进：什么叫定标？一般如何定标？

江叔冠

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高手请进：什么叫定标？一般如何定标？

是说的制图还是cnc?

用BCA法测蛋白浓度，A,B,C,D,的成份都是什么，配成的F可以保存多久，还是每次测都要现配啊

1. 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。 2. 完全溶解蛋白标准品，取10微升稀释至100微升，使终浓度为0.5mg/ml。蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。 3. 将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20微升加到96孔板的标准品孔中，加标准品稀释液补足到20微升。 4. 加适当体积样品到96孔板的样品空中，加标准品稀释液到20微升。 5. 各孔加入200微升BCA工作液，37℃放置30分钟。注：也可以在室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间。 6. 测定A562，540-595nm之间的波长也可接受。根据标准曲线计算出蛋白浓度。
事先配好各个浓度的bsa标准品， step 1 A液和B液按 50：1混合，（比如你要测2个样品，可以是6个标准曲线点 0，0.05，0.1，0.2，0.5，1mg/ml，加上2个样品，也就是8个孔，做平行就是16孔，那么取A液取16*0.2=3.2ml，B液取64ul 混合就ok了） step2 每孔加200ul混合液，然后标准曲线孔加入25ul标准品，样品稀释到合适的比例，也加入25ul（如果图省事的话，比如也可以加1ul样品，再加24ul水补齐，加样的时候可能不会太准） step3 37度孵育30min step4 测 od 565，附近也行

液相色谱法中标准品和标准曲线有什么用？标准品的色谱图与标准曲线和样品的检测有什么关系？

利用外标法和内标法对样品进行标定的检验方法需要用到标准品和标准曲线。标准品是购得的，已知含量和纯度的纯物质，用其配置溶液用来计算色谱峰面积与物质量之间的关系系数。标准曲线是用多个浓度点的标准品溶液所做出的峰面积与其浓度形成的关系做趋势线，形成了横轴浓度与峰面积Y的关系。即标准曲线。
样品溶液进样后形成的峰面积带入该曲线即可算的样品浓度，反推样品纯度用来计算样品含量。