今天养殖艺技术网的小编给各位分享流式抗体有哪些牌子的养殖知识，其中也会对如何选择适合的流式抗体（五）：举例(流式抗体一般买多大规格的)进行专业解释，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注本站，现在我们开始吧！
如何选择适合的流式抗体（五）：举例
举例一：BD流式仪器FACSCalibur试剂选择及常见问题解答
一、如何搭配流式抗体荧光标记
流式抗体荧光标记搭配主要由3个因素决定的：流式细胞仪能检测多少个通道、需要同时检测检测多少个指标、厂家的抗体有多少种荧光标记。如果流式细胞仪的通道越多，那么同一份样本能同时做的表面/胞内标志就越多
A、 如何根据流式细胞仪搭配流式抗体
1） BD流式细胞仪（06版目录第614页）
流式细胞仪能检测多少个通道是由有多少根激光决定的以及每根激光的功能决定的，所以首先需要注意两点：
流式细胞仪有哪些激光。比如标配的FACSCalibur只有一根488nm的激光，能做FL1、FL2、FL3三个荧光通道/三个颜色，而选配的Calibur (FACSCalibur的简称)配有488nm和635nm两根激光，可以检测FL1-FL4四个通道/4个颜色。
不同型号的流式细胞仪的同样的一个通道检测荧光素的能力是不一样的，比如Calibur的FL3（第3通道）能检测PE-Texas Red, PE-Cy5, PerCP, PerCPCy5.5,PE-Cy7,而Aria的第3通道只能检测PE-TexasRed, PE-Cy5, PerCP。Calibur第3通道能检测的PerCP-Cy5.5在FACSAria上是第4通道检测。Calibur和LSR都能检测4个颜色，但是第4个通道检测荧光素是不一样的
搭配荧光素原则
搭配流式荧光素有2个原则：每个通道只能选择1种荧光素；各个通道之间的荧光素可以随意搭配，但需注意
1、每个通道只能选择1种荧光素。以Calibur为例说明，Calibur的FL1通道选择了FITC就不能选择AlexaFluro488，或者选择了Alexa Fluro488就不能选FITC Calibur的FL3通道尽管能检测PE-Texas Red, PE-Cy5, PerCP, PerCP-Cy5.5, PE-Cy7五个荧光素，但是我们我们搭配的时候只能选择其中1个。
2、各个通道之间的荧光素可以随意搭配：如果客户的流式细胞仪能做4个通道，在第1个原则之下，那么每个通道随便选出1个荧光素就可以组合成4个颜色。以2跟激光的Calibur为例，Calibur各个荧光素之间可以搭配出16种组合。
比如常用的搭配是F I T C( F L 1 )＋P E（F L 2）＋PerCP（FL3）+APC(FL4), 这个搭配组合可以更改成Alex Fluro(FL1)＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+APC(FL4), 或者FITC(FL1)＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+Alex Fluro(FL4)，或者FITC(FL1)＋PE（FL2）＋PE-Cy5（FL3）+APC(FL4)等等。总之，在第1原则之下，我们可以随意搭配和组合各个荧光素。但是需要注意的是，APC和PE-Cy5一起使用的话，上流式以后，容易导致补偿过度
B、 BD公司抗体有多少种荧光素
1） 供应商能提供的每种抗体的荧光素是不一样的我们需要根据同时结合供应商能提供的每种抗体的荧光素进行搭配。原则上同一个标志的不同的**号带同1个荧光素在应用上没有区别的，但是有些不同**号的抗体之间可能会有一些稍微的差异，需要仔细看说明书。我们可以尽量选择在说明书上有流式图形的抗体，或者选择荧光素种类最多的**号的抗体
2） 荧光素
可以******bdbiosciences***m/spetra，输入荧光素和检测的BD流式细胞仪机型及激发光，就可以查到相应的波长。
为什么要推荐使用Alex Fluro488和Alex Fluro647呢？
因为这些荧光非常明亮，对激光非常稳定，适合流式细胞仪的光谱性质，对PH值不敏感，具有水溶性。此外，他们联合使用时发射光谱存在巨大差异，无需补偿。
C、如果检测的指标数目超过了流式细胞仪的通道，怎么办？
如果需要做5个指标，而流式细胞仪只能做4个通道，首先将指标归成2类，再将样本分成2份，分别检测。比如需要同时检测CD3、CD4、CD8、IL-4和IFN-gamma，那么将样本分成两份，第1份加CD3、CD4、CD8和IL-4，而第2份加CD3、CD4、CD8和IFN-gamma。
二、同型对照（Isotypy Control）
1、为什么要用同型对照？
同型对照是使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色。同型对照是真正意思上的*性对照，它不但可以用来设定流式细胞仪的电压，而且还可以帮忙省去昂贵与繁琐的重组细胞因子竞争封闭步骤。在流式细胞仪上样前，染色方式如下：
样本管：一抗＋样本
同型对照管：同型对照＋样本
2、如何选择同型对照？
一般选择与一抗的成分完全相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体，比如抗人的CD56 APC标记的抗体，货号是555518,成份是Mouse IgG1,κ。那么它的同型对照应该是APC标记的Mouse IgG1,κ，货号是555751。注意同型对照的成份跟它的名称是相同的.如果是抗体的组合形式是纯化的一抗＋荧光标记的二抗，那么应该选择一抗的同型对照。比如CDw125的纯化抗体，货号是555901，成分是Mouse IgG1,κ。它的同型对照是纯化的Mouse IgG1,κ，货号是555746。它的二抗PE标记的抗小鼠IgG1,货号是550083。那么染色方式如下：
样本管：纯化的CDw25＋PE标记的抗Mouse IgG1＋样本
同型对照管：纯化的同型对照＋PE标记的抗Mouse IgG1＋样本
如果没有找到适合的同型对照，在保持来源相同、荧光标记相同、免疫球蛋白类别相同条件下，那么优先选择的顺序应该是亚链不同－－亚型不同－－相同类别。比如，某种的抗体的来源是Mouse IgG2а,κ。如果在同型对照表里面找到不到完全相同的同型对照，那么优先选择相同荧光标记的Mouse IgG2а为同型对照。如果也没有找到Mouse IgG2а，那么优先选择相同荧光标记的Mouse IgG2b作为同型对照。如果最后还是没有找到Mouse IgG2b，那么选者相同荧光标记的Mouse IgG2作为同型对照。
3、如何查找同型对照？
同型对照在BD英文目录中或者BD网站上跟它对照的抗体的位置是一致的。BD目录中，抗人的抗体的同型对照都在HUMAN章节后面。抗小鼠的抗体的同型对照在MOUSE章节后面，非人类灵长类的抗体同型对照在NON HUMAN PRIMATE章节后面。由于抗大鼠的抗体非常少，大部分抗体都是小鼠来源的，所以它的同型对照跟小鼠的一样，放在MOUSE章节后面。胞内细胞因子、趋化因子、补体、炎症介质及其受体的同型对照放在其章节的后面（注意：人的胞内细胞因子的同型对照跟人的表面标志的同型对照是不在一起的）。Phosflow的同型对照在Phosflow的介绍后面。比如，比如抗人的CD56 APC标记的抗体，货号是555518，在06版BD目录的169页，成份是Mouse IgG1,κ。那么它的同型对照应该是在HUMAN章节中Mouse Immunoglobulin Isotype表格中，第191页，APC标记的Mouse IgG1,κ，货号是555751。
4、哪些客户需要使用同型对照？
A 对流式不是非常熟悉的客户。
B 做胞内流式客户，比如胞内细胞因子、趋化因子和信号蛋白等。
C 使用不常见的标志或者特异性不高的标志的客户，因为客户不熟悉不常见标志的表达情况，根据同型对照可以判断阳性细胞的位置。一些特异性不高的抗体，如多抗，非特异性结合非常多，使用同型对照可排除假阳性。
D 对流式非常熟悉又使用常用的表面标志的客户一般可以不使用同型对照。
5、为什么有时候同型对照的表达会比抗体的表达高？
首先需要检查同型对照的抗体是否加错类型、剂量等。其次，因为有些标志在细胞的表面或者胞内表达不高，而跟其类似的抗原非常多，那么加入同型对照时，同型对照非特异性的结合会超过抗体的特异性，所以会造成这种现象，在细胞表面时如图所示。这个时候推荐使用其他*性对照，如空白对照等。
三、补偿微球
流式细胞仪的荧光补偿隔一段时间之后需要调整到适合的位置。如果荧光补偿没有调节好，会导致细胞分群不明显或者流式检测得到的结果图非常不漂亮，而且会影响到检测结果的不真实。荧光补偿的调节对初学者来说非常不容易掌握，同时，补偿调节是流式细胞术中比较难掌握的操作。尤其是一些不常见的标志检测时，需要经验非常丰富的流式操作者根据多年的经验判断调节补偿，才可以得到比较好的数据和图片。那么，现在不需要这么麻烦。因为补偿微球让一切变得更简单。BD CompBeads是专用于流式细胞仪多色分析的荧光补偿调整微球。它的实用性是在于克服了以往普通的做三色以上的流式分析时补偿难调、耗费样本（往往用待测样本单标来进行补偿调节）的缺点。它本身不携带任何荧光，借助于与客户自己的特异性荧光抗体孵育结合来调节补偿。它不但能象待测的样本细胞一样在同样的实验条件下固定、破膜等，操作起来很简单，灵敏度高，一致性好，使补偿更轻松更准确，而且最难得的是它最适合于多色分析（如五色、六色、七色等）和复合荧光素（如PE-Cy7、APC-Cy7等），因为这时的补偿往往难度较大。各型号的流式仪器均能使用。Compbeads使用后可以将流式的条件保存，方便下次做同样的荧光染色搭配时参考用。
国内外生产抗体的比较可信的公司有哪些？
每个公司都有自己质量很好的产品呀，而且应用不同，种属不同，你选择产品都会影响到实验结果。一定要说比较的公司如CST, abnove,Fantibody等等。
理科是什么
请教小鼠 FOXP3的问题
1、过夜固定破膜？究竟是固定过夜还是破膜过夜？
2、foxP3孵育，时间太长可能不是很好，抗体荧光容易衰减，导致分群不清。
3、如果FSC、SSC显示细胞状况还可以，就不会跟悬液制备有关。建议如果有可能，加一个live/dead染液。
4、foxP3抗体加少了肯定会影响，抗体用量需要做滴定。
WB、FITC、IHC-P、IHC 各代表含义？
WB：蛋白质印迹
FITC：异硫氰酸荧光素
IHC-P：石蜡切片的免疫组化技术
IHC：免疫组织化学
蛋白质样品获得：细菌诱导表达后，可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或***室温匀浆0.5-1min。4℃，13,000g离心15min。取上清液作为样品。
免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。
扩展资料：
（fluorescein isothiocyanate， FITC） FITC纯品为**或橙**结晶粉末，易溶于水和酒精溶剂。有两种异构体，其中异构体Ⅰ型在效率、稳定性与蛋白质结合力等方面都更优良。
FITC分子量为389.4，最大吸收光波长为490～495nm，最大发射光波长为520～530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。FITC在冷暗干燥处可保存多年，是应用最广泛的荧光素。其主要优点是人眼对黄绿色较为敏感，通常切片标本中的绿色荧光少于红色。
参考资料来源：百度百科-异硫氰酸荧光素
国内做抗体定制的公司有哪些?
像上海基尔顿，JIer dun他们都可以的
什么是流式抗体
用于流式细胞仪检测的抗体，与之相对应的有免疫组化抗体，免疫荧光抗体等等
用ebioscience流式抗体前细胞需要固定，封闭吗
该厂家出的抗体和其他厂家出品的并没有不同，都要遵守基本的流式的原则：
每一个抗体在使用前都需要进行质控确认，也就是说，需要使用已知阳性的细胞来进行检测，看是否有阳性信号
获得阳性信号以后，在对抗体的工作浓度进行优化，取得最高的染色指数（stain index）。以后实验时，就按照这个工作浓度和细胞数量。
固定会改变抗原的空间结构，有些抗体的识别会受到影响。所以染细胞表面抗原的都不要固定。同时染胞内，胞外的，染好胞外的，在固定，破膜，染胞内的。
封闭建议使用和抗体同种的非特异性血清
培养细胞的双抗过期了还能用吗?
双抗过期了最好就不要用啦，双抗过期就没有效果了。如果长期有效的话还要保质期干什么呢。
双抗 是一种含有青霉素(10,000 IU)和链霉素(10,000µg/mL)在100倍的工作浓度的混合液。
如何配制双抗：
用20mL空针抽16毫升三蒸水(或PBS)，溶160万单位/瓶的青霉素G钠一支，过滤除菌；用10mL空针抽10毫升三蒸水(或PBS)，溶一支100万单位/瓶的硫酸链霉素一支，过滤除菌。分装至EP管中，-20度保存。使用前每100ml培养液加双抗各100ul-150ul即可。 细胞培养液双抗浓度：青霉素G钠，100-1000U/ml；硫酸链霉素，100-1000μg/ml(100万单位=1g)。
