今天养殖艺技术网的小编给各位分享凝胶过滤的介质有哪些的养殖知识,其中也会对凝胶过滤法公式?(凝胶过滤法的原理)进行专业解释,如果能碰巧解决你现在面临的问题,别忘了关注本站,现在我们开始吧!
凝胶过滤法公式?
凝胶过滤,英文Gel filtration凝胶过滤法又称分子排阻法, 凝胶过滤法所用的介质为凝胶珠,其内部为多孔网状结构。一定型号的凝胶网孔大小一定,只允许相应大小的分子进入凝胶颗粒内部,大分子则被排阻在外。洗脱时,大分子随洗脱液从颗粒间隙流下来,洗脱液体积小,小分子则在颗粒网状结构中穿来穿去,历程长,后洗脱下来,洗脱体积大。缺点:从凝胶过滤的原理可知,蛋白质分子通过凝胶柱的速度(即洗脱体积的大小)并不直接取决于分子的质量,而是它的斯笃克半径,利用凝胶过滤法测定蛋白质分子量时,标准蛋白质(已知分子量和斯笃克半径)和待测蛋白质必须具有相同的分子形状(接近球体),否则不能得到比较准确的分子量。分子形状为线形的或与凝胶能发生吸附作用的蛋白质,则不能用此方法测定分子量。而且柱子成本比较高,整个实验过程耗时很长。
影响凝胶过滤层析实验结果的因素有哪些?
有以下因素,(1)层析柱的选择,主要是层析柱的长度对分辨率影响较大,长的层析柱分辨率要比短的高。(2)凝胶柱填装情况将直接影响分离效果,凝胶柱填装后用肉眼观察应均匀、无纹路、无气泡。(3)洗脱液的选择,改变洗脱液的主要目的是为了消除组分与固定相的吸附等相互作用,所以和其它层析方法相比,凝胶层析洗脱液的选择不那么严格。(4)加样量,加样量对实验结果也可能造成较大的影响,加样过多,会造成洗脱峰的重叠,影响分离效果;加样过少,提纯后各组分量少、浓度较低,实验效率低。(5)洗脱速度 洗脱速度也会影响凝胶层析的分离效果,一般洗脱速度要恒定而且合适。
为什么凝胶过滤会增大体积?
凝胶过滤是依据分子量的不同来进行分离的,由于它的这一分离特性,以及它具有简单、方便、不改变样品生物学活性等优点,使得凝胶过滤成为分离纯化生物大分子的一种重要手段,尤其是对于一些大小不同,但理化性质相似的分子,用其它方法较难分开,而凝胶过滤无疑是一种合适的方法
外水体积是指凝胶柱中凝胶颗粒周围空间的体积,也就是凝胶颗粒间液体流动相的体积。内水体积是指凝胶颗粒中孔*的体积,凝胶层析中固定相体积就是指内水体积。基质体积是指凝胶颗粒实际骨架体积。而柱床体积就是指凝胶柱所能容纳的总体积
凝胶过滤层析和凝胶电泳的原理、操作方法和结果有何不同?
凝胶过滤是利用分子大小差异进行分离的。原理是:凝胶具有孔隙,大的蛋白质分子不能进入孔隙,直接被冲洗下来,用时短,小分子蛋白以不同程度进入孔隙,所走路径长,用时长。所以蛋白得以分离。电泳是利用所带电荷不同来分离的。带电荷的蛋白以不同速度向相反电级处移动,所带电荷大的移动的快,小的慢。