Channaargus和Channamaculata属于鳢科家族。杂交[杂交(hybridization;cross;crossing)定义:两条单链DNA或RNA的碱基配对。]鳢是雄性乌鳢Channaargus和雌性斑鳢Channamaculata杂交后代。杂交鳢因其生长速度快、抗病性强、可接受商品化饲料等明显的**优势,在养殖过程中一直是黑鱼的优势种,已成为珠江三角地区的主要养殖品种。
罗非鱼[罗非鱼,俗称:非洲鲫鱼,非鲫、越南鱼、南洋鲫等。]湖**[**是颗粒很小、以纳米为测量单位、结构简单、寄生性严格,以复制进行繁殖的一类非细胞型微生物。](TiLV)是一种高传染**毒,与全球罗非鱼养殖的疾病暴发有关。通常,细胞[细胞(英文名:cell)是生物体基本的结构和功能单位。]系常被用于**分离和确定**-宿主相互作用的工具。世界动物卫生组织(OIE)提倡利用细胞培养[细胞培养也叫细胞**技术,在生物学中的正规名词为细胞培养技术。]分离作为**鉴定的金标准。杂交鳢E−11细胞系被用于TiLV的体外培养。此外,与其他细胞相比,如TmB或OmB,E−11细胞更有利于TiLV复制,获得更高的**滴度。
为了检测和分离鱼类**,已经建立了许多鱼类细胞系。来自不同物种不同组织的细胞系对于研究物种在细胞水平上对**感染[《感染》 是一部由落合正幸执导的恐怖电影。]的特异性[通过体外培养患者自身的抗癌细胞,然后回输到患者体内,达到科学抗癌的目的。]反应具有重要意义。此外,**在细胞培养上的传播将促进针对多种鱼类疾病的**的开发。鱼类细胞系已成为**学研究的重要模型和工具。
今天为大家介绍一篇论文,该研究通过建立杂交鳢脑细胞系(CAMB),揭示了及其对TiLV分离和复制检测的适用性。结果表明TiLV在CAMB细胞内具有复制的能力,本研究对于阐明罗湖**病(TiLVD)的发病机制具有深远的意义,引用信息如下:
研究结果如下:
1.CAMB细胞系建立和鉴定:利用0.25%胰蛋白酶溶液和0.1%胶原酶i的混合物,从杂交鳢的脑组织中建立CAMB细胞系。细胞在L-15培养基[培养基(Medium)是供微生物、植物组织和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。]中培养,添加20%胎牛血清,每3-4天传代[传代又称传袋,婚俗之一。]一次。10次传代后,细胞按1:3-4传代,间隔2-3天,培养基中FBS浓度降低至10%。形态学[形态学是用来特指一门专门研究生物形式的本质的学科。]上,在CAMB细胞的初始传代中观察到含有成纤维细胞和上皮细胞[上皮细胞指的是位于皮肤或腔道表层的细胞。]的异质群体。然而,在第15代传代后,均匀的长薄状的上皮细胞占多数。20代后,在6%-8%胎牛血清L-15培养基中CAMB细胞传代,比例为1:3或1:4。传代后,在这些高传代中只观察到上皮样细胞。
2.CAMB细胞生长条件:M199是最适合CAMB细胞的培养基,FBS浓度为15%和20%时,生长速度最快。在27℃时生长情况最好。
3.CAMB细胞冻存效果和染色体[染色体(Chromosome ),是细胞内具有遗传性质的物体,易被碱性染料染成深色,所以叫染色体(染色质),其本质为双股螺旋之脱氧核糖核酸,是细胞核内由核蛋白组成、能用碱性染料染色、有结构的线状体,是-ranseti]核型分析:从形态学上看,低温保存和解冻后细胞无明显变化,细胞活力良好。CAMB细胞的染色体数目异常,在36到128之间。
4.CAMB细胞对TiLV敏感性测定及**滴度测定:TiLV感染CAMB细胞系后其浓度在2d逐渐增加,3d后细胞病变,TCID50从100.65,到12d后达到107.2TCID50/mL。
5.免疫荧光标记TiLV感染的CAMB:感染细胞后,用IFA-TiLV特异性单**抗体检测**,结果显示感染CAMB的TiLV-2017A的荧光信号很强。
6.用CAMB上复制的TiLV感染罗非鱼:感染7d,TiLV-2017A处理的实验鱼组织病理学改变明显。**静脉周围可见白细胞浸润,部分肝坏死,脾脏巨噬细胞以及肾小管上皮细胞颗粒变性,溶解。
总结:该研究从杂交鳢脑中获得永久性生长的鱼细胞系CAMB,为提供TiLV**的分离和鉴定提供有用的工具。该细胞系的开发将为TiLV的检测、TiLV**的制备以及疾病的控制和预防措施等奠定基础。此外,它还将开辟一个新的研究领域,如直接在细胞水平上研究体外TiLV发病机制。